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色谱柱的保养
 

凯发登录色谱柱是化合物别离的要害。保养杰出的色谱柱具有很高的塔板数,且仪器基线平稳。

1、避免压力和温度的急剧改动及任何机械轰动。温度的忽然改动或许使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的忽然升高或下降也会激动柱内填料,因此在调理流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的滚动不能过缓。

2、应逐步改动溶剂的组成,特别是反相色谱中,不该直接从有机溶剂改动为全部是水,反之亦然。

3、色谱柱反冲,纳谱剖析小分子别离液相色谱柱ChromCore系列和EcoPak系列色谱柱能够反冲;纳谱剖析手性色谱柱UniChiral系列色谱柱能够反冲,反冲能够除掉留在柱头的杂质。可是纳谱剖析生物大分子液相色谱柱BioCore系列色谱柱不要反冲,不然反冲会敏捷下降柱效。

4、挑选运用适合的活动相,以避免固定相被损坏。有时能够在进样器前面衔接一预柱,剖析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使活动相在进入剖析柱之前预先被硅胶“饱满”,避免剖析柱中的硅胶基质被溶解。

5、避免将基质杂乱的样品尤其是生物样品直接注入柱内,需求对样品进行预处理或许在进样器和色谱柱之间衔接一维护柱。维护柱一般是填有类似固定相的短柱。维护柱能够并且应该常常替换。

6、常常用强溶剂冲刷色谱柱,铲除保存在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路体系中活动相的置换应以相混溶的溶剂逐步过渡,每种活动相的体积应是柱体积的20倍左右,即惯例剖析需求50~75ml。

下面罗列一些色谱柱的清洗溶剂及次序,作为参阅:

硅胶柱以正已烷、二氯甲烷和甲醇顺次冲刷,然后再以相反次序顺次冲刷,一切溶剂都必须严厉脱水。甲醇能洗去残留的强极性杂质,已烷使硅胶外表从头活化。

反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷顺次冲刷,再以相反次序顺次冲刷。

假如下一步剖析用的活动相不含缓冲液,那么能够省掉最终用水冲刷这一步。一氯甲烷能洗去残留的非极性杂质,在甲醇冲刷时重复打针100~200µl四氢呋喃数次有助于除掉强疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除掉类脂。有时也打针二甲亚砜数次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸梯度洗脱能除掉蛋白质污染。

阳离子交流柱可用稀酸缓冲液冲刷,阴离子交流柱可用稀碱缓冲液冲刷,除掉交流功能强的盐,然后用水、甲醇、二氯甲烷、甲醇、水顺次冲刷。

7、保存色谱柱时应将柱内充溢乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,避免溶剂蒸发枯燥。制止将缓冲溶液留在柱内静置过晚上或更长时刻。

8、色谱柱运用过程中,假如压力升高,一种或许是烧结滤片被阻塞,这时应替换滤片或将其取出进行清洗;另一种或许是大分子进入柱内,使柱头被污染;假如柱效下降或色谱峰变形,则或许柱头呈现陷落,死体积增大。

在后两种状况产生时,当心拧开柱接头,用洁净小钢将柱头填料取出1~2mm高度再把柱内填料整平。然后用恰当溶剂湿润的固定相填满色谱柱,压平,再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改进,可是很难康复到新柱的水平。

柱子失效通常是柱端部分,在剖析柱前装一根与剖析柱相同固定相的短柱,能够起到维护、延伸柱寿数的效果。选用维护柱会丢失必定的柱效,这是值得的。

通常以硅胶为基质的色谱柱,只能在pH2~9范围内运用。柱子运用一段时刻后,或许有一些吸附效果强的物质保存于柱顶,特别是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。新的色谱柱在运用一段时刻后柱顶填料或许陷落,使柱效下降,这时也可补加填料使柱效康复。

每次作业完后,用洗脱能力强的洗脱液冲刷,例如ODS柱宜用甲醇冲刷至基线平衡。当选用盐缓冲溶液作活动相时,运用完后运用无盐活动相冲刷。含卤族元素的化合物或许会腐蚀不锈钢管道,不宜长时间与之触摸。装在HPLC仪上柱子如不常常运用,应每隔4~5天开机冲刷15分钟。


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